Forskjell mellom versjoner av «BioHackerLab»
(Notater om PCR-prosjekt) |
(→PCR prosjekt) |
||
Linje 52: | Linje 52: | ||
Fast utstyr: | Fast utstyr: | ||
− | *PCR-maskin/thermocycler. Automatiserer | + | *PCR-maskin/thermocycler. Automatiserer temperaturegulering gjennom reaksjonsforløpet. Temperatur-regulering kan i teorien gjøres manuelt med vannbad ved ulike temperaturer, men dette blir temmelig langsomt og kjedelig! |
*Mikropipette(r) | *Mikropipette(r) | ||
− | * | + | *En eller flere fasker til agarose, ca. 250 mL (fortrinnsvis glass, bør passe i mikrobølgeovn) |
− | *Mikrobølgeovn | + | *Mikrobølgeovn (til oppvarming av agarose), evt. annen varmekilde + magnetrører |
+ | *Bør ha: Mikrosentrifuge. | ||
For visualisering av DNA-fragmenter: | For visualisering av DNA-fragmenter: | ||
*Gel-elektroforesekammer | *Gel-elektroforesekammer | ||
− | * | + | *Strømforsyning |
*Transilluminator m/filter og/eller filterbriller | *Transilluminator m/filter og/eller filterbriller | ||
Linje 70: | Linje 71: | ||
*PCR mastermix | *PCR mastermix | ||
*TAE buffer | *TAE buffer | ||
− | *DNA-fargestoff | + | *DNA-fargestoff (riktig type med hensyn til transilluminator) |
*DNA-ladder (standard-fragmenter til elektroforese) | *DNA-ladder (standard-fragmenter til elektroforese) | ||
− | |||
*Elektroforese-agarose | *Elektroforese-agarose | ||
+ | *DNA primere (eksperiment-spesifikke) | ||
+ | |||
+ | Sikkerhetsutstyr: | ||
+ | *Vernebriller | ||
+ | *Engangshansker | ||
+ | *Varmeisolerende hansker e.l. til håndtering av varm agarose | ||
+ | |||
+ | Sikkerhetsmomenter: | ||
+ | *Strøm gjennom elektroforesebad (ca. 50-100 V) | ||
+ | *Varm agaroseløsning | ||
+ | *Støtkoking eller glasseksplosjon ved oppvarming av agarose i mikrobølgeovn | ||
+ | |||
+ | Avfallshåndtering, generelt: | ||
+ | *Størknet agarose kastes som restavfall. Flytende agarose må ikke tømmes i avløp, da dette vil størkne ved avkjøling. | ||
+ | *Øvrige flytende reagenser kan helles i avløp | ||
+ | *Forbruksmateriell av plast med eventuelle reagensrester kastes i restavfall |
Revisjonen fra 19. mai 2016 kl. 11:26
BitLab? BioRaf?
Planlegging
Det har i det siste vært diskusjoner om å starte en egen lab for biologi på Bitraf. Bitraf har allerede medlemmer som jobber med hydroponics/aquaphonics og flere er interessert i ølbrygging. 18 Mai 2016 var det første møtet for folk som er interessert i å starte opp dette. Ønsket er å utvide foreningen med et lokale som egner seg for Gjør-det-selv-biologi og Biologi-hacking som retter seg etter norsk lov og de etiske retningslinjene fremsatt av European DIYbio Congress.
Summary from Bitraf's 1'st MeetUp: https://drive.google.com/file/d/0B5j_-m_-t56rMXNHVVkwVEpUVjg/view
Courses and Equipment: https://docs.google.com/spreadsheets/d/1M2TKaHVBQ3iLuV55A8JCwTCzPXx_aNDFoxyzZBgSM8o/edit#gid=0
Videre jobbing
De av deltakerne som ønsket å jobbe med dette videre delte seg i to grupper som skal jobbe med Mikrobiologi og Utstyr til labben. Mikrobiologi-gruppen har planer for å jobbe med ølbrygging og klassifisering av gjær med Open PCR.
Utstyr vi ønsker oss
- OpenPCR
- UV-kamera
- Fumehood
- Filter til Fumehood
- Høypresisjons pipetter
- Sentrifuge
- Vortexer
- Fryser
- Elektroforese
- Varmeskap med shaker
- Mikroskop
- Steam cooker for cleaning
- Lab-glass (flasker, rør m.m.)
- Filter-utstyr
- Vekst-medier
- Qubit Spectrometer (or similar)
I tillegg trenger vi også møblene til et slikt lokale. I Pløens Gate 4 finnes det ledige lokaler som man etter hvert kan etablere selve Lab'en i, men dette ligger et stykke fremover i tid. Finansiering må på plass før man kan ta over mere areal.
PCR prosjekt
Hva er PCR?
- Polymerase chain reaction/polymerase kjedereaksjon: https://en.wikipedia.org/wiki/Polymerase_chain_reaction
- PCR brukes for å kopiere DNA. En PCR-maskin med reagenser er en "kopi-maskin" for DNA.
- PCR kan brukes til å opparbeide (amplifisere) DNA fra naturlige kilder/biologisk materiale for videre bearbeidelse.
- DNA-fragmenter med en kjent sekvens (rekkefølge på nukleotider, "bokstavene" i DNA) i hver ende velges ut og kopieres selektivt.
- Sammensetning og lengde av DNA-tråden mellom start- og sluttpunktet kan variere. Informajson om lengden av DNA-fragmentene (visualiseres ved gel-elektroforese), og om kopiering fant sted (positiv/negativ reaksjon) kan brukes til å gjøre enkle genetiske analyser.
- Opparbeidet DNA kan (gitt god nok mengde og kvalitet) sendes til nærmere analyse av DNA-sekvensen (sekvensering).
Hvorfor gjøre PCR?
- En (relativt) lavterskel aktivitet, med begrenset behov for opplæring, gode muligheter for å lykkes, overkommelige kostnader og få risikomomenter.
- En klassisk molekylærbiologi-teknikk. I daglig bruk verden over. Uunnværlig for molekylærbiologisk forskning og medisinsk diagnostikk. Nobelpris-vinnende.
- Potensiale for praktiske anvendelser med allmenn interesse. F.eks kontroll av artsopprinnelse for matvarer.
Hva trengs for PCR?
Fast utstyr:
- PCR-maskin/thermocycler. Automatiserer temperaturegulering gjennom reaksjonsforløpet. Temperatur-regulering kan i teorien gjøres manuelt med vannbad ved ulike temperaturer, men dette blir temmelig langsomt og kjedelig!
- Mikropipette(r)
- En eller flere fasker til agarose, ca. 250 mL (fortrinnsvis glass, bør passe i mikrobølgeovn)
- Mikrobølgeovn (til oppvarming av agarose), evt. annen varmekilde + magnetrører
- Bør ha: Mikrosentrifuge.
For visualisering av DNA-fragmenter:
- Gel-elektroforesekammer
- Strømforsyning
- Transilluminator m/filter og/eller filterbriller
Forbruksmateriale:
- Eppendorf-rør (plastrør, ca. 1.5 mL)
- PCR-rør (plastrør, ca 0.5 mL)
- Pipette-spisser
Reagenser:
- PCR mastermix
- TAE buffer
- DNA-fargestoff (riktig type med hensyn til transilluminator)
- DNA-ladder (standard-fragmenter til elektroforese)
- Elektroforese-agarose
- DNA primere (eksperiment-spesifikke)
Sikkerhetsutstyr:
- Vernebriller
- Engangshansker
- Varmeisolerende hansker e.l. til håndtering av varm agarose
Sikkerhetsmomenter:
- Strøm gjennom elektroforesebad (ca. 50-100 V)
- Varm agaroseløsning
- Støtkoking eller glasseksplosjon ved oppvarming av agarose i mikrobølgeovn
Avfallshåndtering, generelt:
- Størknet agarose kastes som restavfall. Flytende agarose må ikke tømmes i avløp, da dette vil størkne ved avkjøling.
- Øvrige flytende reagenser kan helles i avløp
- Forbruksmateriell av plast med eventuelle reagensrester kastes i restavfall